AVALIAÇÂO DA CITOGENOTOXICIDADE DE CURSOS D\'ÁGUA DO CORREGO SEVERO EM ALTA FLORESTA-MT

AVALIAÇÂO DA CITOGENOTOXICIDADE DE CURSOS D'ÁGUA DO CORREGO SEVERO EM ALTA FLORESTA-MT DOS SANTOS, Bruna Natália Veloso (1), MACEDO, Weslaine de Almeida (1); DA SILVA, Rosália do Nascimento (1), SOUZA, Sérgio Alessandro Machado (2) em Ciências Biológicas – UNEMAT/ Campus Alta Floresta, MT. Prof. da Universidade do Estado de Mato Grosso/ UNEMAT – PPGBioAgro – Campus Alta Floresta, MT, Brasil. 1 Graduandos 2

RESUMO O objetivo deste trabalho foi avaliar a citogenotoxicidade do córrego Severo, localizado no município de Alta Floresta, MT, por meio do sistema teste Allium cepa como bioindicador. Realizaram-se testes de análise de crescimento de raízes e índice mitótico (IM) em células meristemáticas radiculares tratadas com águas de quatro pontos do córrego e água destilada como controle. Para crescimento das raízes, os pontos 1, 2, 3 e 4 diferiram do controle. Os resultados para IM foram significativos nas diferentes amostras de água testadas, mas não comprovando o citotóxico das mesmas e por meio do bioensaio realizado foram detectados efeitos genotóxicos nos parâmetros macroscópicos analisados. Palavras-chave: biomonitoramento, índice mitótico, divisão celular ABSTRACT The objective of the present study was to evaluate the cytogenotoxicity of the Córrego Severo stream using the Allium cepa (common onion) system as a bioindicator. For both tests analysis of root growth and the mitotic index (MI) of meristematic root cells, treated with water from four points of the stream, was performed. Distilled water was used as a control. The sample taken from Point 1, 2, 3, and 4 of the stream differed from control, for the variable root growth. the statistical results for the variables MI and root growth were highly significant for the different water samples tested, and bioassay performed using the Allium test detect significant genotoxic effects in macroscopic study. Key-words:biomonitoring, mitotic índex, cell division INTRODUÇÃO Muitos problemas de saúde humana, incluindo alguns tipos de câncer, atualmente, são atribuídos à presença de diversos contaminantes presentes no meio ambiente e na água (Fatima & Ahmad, 2006. Resíduos industriais, urbanos e agrícolas são lançados indiscriminadamente nos cursos d'água acrescentando vários contaminantes às águas superficiais e sedimentos (Egito et al., 2007). Para a avaliação, monitoramento e detecção de contaminantes no ambiente, os bioensaios com plantas superiores têm sido recomendados (Grant, 1999). O teste de Allium cepa desenvolvido por Levan (1938) é considerado uma ferramenta útil para a pesquisa básica do potencial genotóxico e citotóxico de produtos químicos, substâncias complexas como extratos de plantas, dejetos industriais e, principalmente, águas contaminadas. 1

O Allium Teste fornece dois tipos de toxicidade. Parâmetros macroscópicos que podem ser observados consistem em formação de tumores, avaliação de crescimento de raízes e raízes torcidas, entre outros. Índice mitótico, para a análise de taxa de divisão celular, aberrações cromossômicas, como: cromossomos em anel, pontes cromossômicas, cromossomos pegajosos, retardos cromossômicos, que ocorrem principalmente nas fases de metáfase e anáfase e formação de micronúcleos, como indicadores de anormalidades no DNA, perfazem parâmetros microscópicos (Monarca et al., 2000). Devido ao crescimento da população, consequente aumento do consumo e variações climáticas sazonais bem definidas, estudos com cursos d'água tornam-se necessários para o monitoramento das condições da água utilizada pela população (Cuchiara, 2012). O objetivo desse trabalho foi avaliar a citotoxicidade e a genotoxicidade de cursos d'água, do córrego Severo em Alta Floresta-MT, por meio do sistema teste Allium cepa como bioindicador, verificando os danos causados em células meristemáticas radiculares. MATERIAL E MÉTODOS O estudo foi realizado ao longo do córrego Severo no mês de julho de 2014, entre 8 e 12h da manhã. Foram coletadas amostras de água de superfície em diferentes pontos pré-determinados e selecionados de forma a se abordar quatro áreas de influência, de acordo com a Tabela 1. Em cada ponto a água foi coletada em recipiente de polietileno de 2 L e esses foram e transportados ao Laboratório de Hidroecologia da Universidade do Estado de Mato Grosso, Campus Alta Floresta, onde foram realizadas as análises. Para o teste foram utilizados 10 bulbos de cebola para cada tratamento (Ponto 1, ponto 2, Ponto 3, Ponto 4), além do controle (água destilada) com aproximadamente 20 mm de diâmetro e com catáfilo externo retirado. Posteriormente foram acondicionados em recipientes plásticos fixos em uma base, na qual permaneceram durante 72h com a área radicular imersa nas diferentes amostras de água e em água destilada como controle. A água testada foi trocada a cada 24h. Ao final das 72h, as raízes dos bulbos de cebola foram observadas e medidas, com auxílio de uma régua milimetrada, para a análise de morfologia e do comprimento radicular. Para análise das amostras de água, raízes dos bulbos foram escolhidas aleatoriamente e retiradas após 48h, identificadas em frascos de 10 mL, fixadas em Carnoy (3:1, álcool etílico:ácido acético) por um período de 24h à temperatura ambiente e, após, acondicionadas em refrigeração para posterior análise. Para análise citogenética foi empregada a técnica de esmagamento, hidrolisadas em HCl 5N por quinze minutos em temperatura ambiente, lavadas em água destilada e coradas com orceína acética 2%. A observação das lâminas foi realizada em microscópio óptico a uma magnitude de 400x, através da técnica de varredura, sendo contadas 2000 células por ponto de coleta, observando-se o número de células em cada fase da mitose. Foi também analisado a presença de aberrações cromossômicas para detecção de danos ao DNA a nível qualitativo. Em delineamento inteiramente casualizado, os resultados foram avaliados através da análise de variância, e em 2

caso de significância, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey, utilizandose o pacote estatístico GENES (Cruz, 2006). Tabela 1. Localização e descrição dos pontos de coleta de água nas diferentes áreas de influência ao longo Córrego Severo. Ponto Ponto 1

Ponto 2

Ponto 3

Ponto 4

Ponto 5

Coordenadas Lat.:095347.5/Long.: 0560448.5/Al.: 281

Descrição Nascente, cuja a agua é transparente e foi encontrada em uma pequena propriedade. Lat.:095343.9/Long.:0560445.2/ Localiza-se ao lado Al.: 274 de uma construção civil e perto do cemitério da cidade. Lat.:095318.4/Long.:0560440.0/Al.: Este se localiza a 277 beira da perimetral Rogério Silva, nele havia lixo e alguns animais domésticos mortos que estavam em avançado estado de decomposição. Lat.: Ultimo ponto que 095141.8/Long.:0560417.1/Al.: 268 se localiza próximo a Universidade (UNEMAT) também a margem da perimetral Rogério Silva, onde haviam peixes mortos e muito lixo. CONTROLE (água destilada)

RESULTADOS E DISCUSSÃO O Allium teste é utilizado para avaliar a qualidade de águas de fundo, superfícies e efluentes, como uma forma simples de estudo de parâmetros macroscópicos, tanto valores de inibição de crescimento de raízes e parâmetros citológicos quanto aberrações celulares em metáfases ou anáfases e inibição de células em divisão (Fiskesjö, 1988; Vesna et al., 1996; Barbério et al., 2011).

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Os dados da Análise de Variância (tabela 1) não apresentaram diferença significativa ao nível de 5% de probabilidade pelo teste F, evidenciando que não houve diferença entre as fontes de variação, referente ao comprimento de raiz. Para a variável crescimento das raízes (tabela 2), verificou-se que em todos os tratamentos, exceto o controle, o crescimento foi mais expressivo. De acordo com estudos de Cuchiara (2012), a toxicidade de líquidos é indicada pela diminuição do crescimento das raízes, onde amostras de água de superfície e de fundo testadas não apresentaram toxicidade. Estes dados corroboram com os observados nesse trabalho, onde nas amostras de água testadas não houve a diminuição do crescimento das raízes, sendo assim não comprovando a toxicidade das mesmas. Tabela 1. Resumo da Análise de raiz. Fonte de variação Tratamento Resíduo Total

de variância (ANOVA), para a variável comprimento gl 4 45 49

SQ QM F 461.114992 115.278748 0.8791ns 5900.9854 131.133009 6362.1004

Tabela 2. Média do comprimento das raízes e do Índice Mitótico observadas em bulbos de A. cepa submetidas às diferentes amostras de água. Ponto Média do comprimento das raízes Índice Mitótico 1 14.42 5,9 a 2 15.02 3.1b 3 16.08 5.85 a 4 12.13 5.55 a 5 7.54 2.4 c Em relação a análise do índice mitótico (IM), os pontos 1, 3 e 4 não diferiram estatisticamente entre si, mas diferiram do ponto 2 e 5. Além do efeito citotóxico, uma análise qualitativa sugeriu um possível efeito genotóxico nas amostras de água, uma vez que, provocou alterações cromossômicas (pontes anafásicas e micronucelos) (Figura 1). Segundo Leme & Marin-Morales (2009), as anormalidades cromossômicas em células de Allium cepa são parâmetros eficientes para a investigação do potencial genotóxico águas contaminadas, pois fornecem informações importantes que devem ser consideradas no biomonitoramento ambiental.

Figura 1.Células meristemáticas de cebola, apresentando pontes anafásicas micronúcleo 4

CONCLUSÕES Os dados observados nesta pesquisa permitem concluir que através do bioensaio realizado utilizando o teste Allium não foram detectados efeitos citotóxicos significativos nos parâmetros macroscópicos analisados, porém alterações genotóxicas foram observadas. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS CUCHIARA, C.C.; BORGES, C.S.; BOBROWSKI, V.L. Sistema teste de Allium cepa como bioindicador da citogenotoxicidade de cursos d'água. Tecnologia. & Ciências Agropecuarias., João Pessoa, v.6, n.1, p.33-38, 2012. EGITO, L.C.M.; MEDEIROS, M.G.; DE MEDEIROS, S.R.B.; AGNEZ-LIMA, L.F. ytotoxic and genotoxic potential of surface water from the Pitimbu river, northeastern/RN Brazil. Genetics and Molecular Biology, Ribeirão Preto, v. 30, n. 2, p. 435-441, 2007. FATIMA, R.A.; AHMAD, M. Genotoxicity of industrial wastewaters obtained from two different pollution sources in northern India: A comparison of three bioassays. Mutation Research, Amsterdam, v. 609, p. 81-91, 2006. GRANT, W.F. Higher plant assays for the detection of chromosomal aberrations and gene mutations a brief historical background on their use for screening and monitoring environmental chemicals. Mutation Research, Amsterdam, v. 426, n. 2, p. 107-112, 1999. LEME, D.M.; MARIN-MORALES, M.A. Allium cepa test in environmental monitoring: A review on its application.Mutation Research, Amsterdam, v. 682, n. 1, p. 71-81, 2009. LEVAN, A. The effect of colchicine on root mitoses in Allium. Hereditas, Lund, v. 24, n. 4 p. 471-486, 1938. MONARCA, S.; FERETTI, D.; COLLIVIGNARELLI, C.; GUZZELA, L.; ZERBINI, I.; BERTANZA, G.E.;PEDRAZZANI, R. The influence of different disinfectants on mutagenicity and toxicity of urban wastewater. Water Research, Londres, v. 34, n.17, p. 4261-4269, 2000.

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