XII CURSO DE INVERNO DE GENÉTICA – FCAV/UNESP
AVALIAÇÃO DA VIABILIDADE POLÍNICA DE PARÁ-PARÁ COM USO DE TRIFENIL CLORETO DE TETRAZOLIO POLLEN VIABILITY ASSESSMENT PARÁ-PARÁ WITH USE OF TRIPHENYL TETRAZOLIUM CHLORIDE. Douglas Machado Leite(1) Bruna Natália Veloso dos Santos(2) Lorena Cristina Batista dos Santos(3) Jenifer Fernanda Damasio(4) Vanessa dos Santos de Mello(4) Weslaine de Almeida Macedo(2) Isane Vera Karsburg(5)
Resumo Este trabalho tem objetivo em avaliar a melhor concentração e tempo de exposição ao 2,3,5 Trifenil Cloreto de Tetrazolio para estimar a viabilidade polínica de Jacaranda copaia (Aubl.) D.Don. Botões em pré antese foram coletados no município de Alta Floresta. O material para coloração com TTC (2,3,5 Trifenil Cloreto de Tetrazolio) coletado e preparado no inicio da manhã nas concentrações de 0,075% e 0,3%, e avaliado após 6h, 12h, 18h e 24h, as laminas foram preparadas pela técnica de esmagamento com uso de uma gota dos respectiva concentração do corante. Para cada horário foram analisados 1500 polens em microscópio óptico Leica. Dentre as concentrações e tempos de exposição avaliado o mais indicado é 0,3% por 12h caso haja necessidade do teste ser rápido, caso a avaliação seja mais precisa pode utilizar a concentração de 0,075% por um período de 24h sendo este o mais eficiente apresentando maior porcentagem de pólen viáveis, caso não necessite de uma resposta rápida. Palavras Chave: Jacaranda. Pólen. Tetrazólio. Viabilidade.
Abstract This study aimed to assess the optimal concentration and length of exposure to 2,3,5 Triphenyl tetrazolium chloride to estimate pollen viability of Jacaranda copaia (Aubl.) D.Don. Buttons pre anthesis were collected in the municipality of Alta Floresta - MT. The material for staining with TTC (2,3,5 Triphenyl tetrazolium chloride) collected and prepared in the morning beginning at concentrations of 0.075% and 0.3%, and evaluated after 6h, 12h, 18h and 24h, the sheets were prepared by crushing technique using a drop of the respective dye concentration. For each time were analyzed in 1500 pollens on Leica optical microscope. Among the concentrations and exposure times and evaluated as indicated 0.3% 12h if there need be quick test if the evaluation is more accurate and can use the concentration of 0.075% for a period of 24 being the most efficient presenting higher percentage of viable pollen, the case does not require a quick response. Keywords: Pollen. Rosewood. Tetrazolium. Viability. ______________________________________________________________________________ 1
Graduando do curso de Bacharelado em Engenharia Florestal – UNEMAT, Alta Floresta – MT, E´mail:
[email protected]. 2 Graduandas do curso de Licenciatura Plena e Bacharelado em Ciências Biológicas – UNEMAT, Alta Floresta - MT.3Bióloga e Educadora da E. Estadual Vitória Furlani da Riva de Alta Floresta – MT. 4 Mestrandas em Genética e Melhoramento de Plantas pela Universidade do Estado de Mato Grosso- UNEMAT Campus Alta Floresta – MT. 5Professora Adjuntado Departamento de Ciências Biológicas- UNEMAT- Campus de Alta Floresta – MT.
Ciência & Tecnologia: Fatec-JB, Jaboticabal, v. 8, n.1, 2016. Número especial 2.
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1. Introdução Conhecido popularmente como Pará-Pará a espécie Jacaranda copaia (Aubl.) pertencente a família Bignoniaceae, possui 33 gêneros e 408 espécies aceitas no Brasil, distribuídos por todo pais, encontrada no norte, nordeste e centro-oeste, sua inflorescência posssui de poucas a muitas flores variando de roxa a azul marinho e raramente branca, sua madeira é utilizada para trabalhos na área da construção civil e artesanato (GENTRY; MORAWETZ 1992, FLORA DO BRASIL, 2016). Conhecer a viabilidade polínica de uma espécie e um instrumento importante no estudo do fluxo gênico, biologia reprodutiva, melhoramento e conservação dos recursos genéticos, fundamental na produção de sementes e no potencial reprodutivo, para espécies alogamas é de grande importância que apresente elevadas taxas de viabilidade, pois dependendo do método utilizado na polinização uma grande quantidade de pólen se perde, e uma das técnicas de conhecer essas taxas são os métodos colorimétricos, que distinguem os polens férteis (viaveis) dos estéreis (inviaveis) (MARTINS et al., 2012, DAFINI, 1992). O teste colorimétrico utilizando 2,3,5 Trifenil Cloreto de Tetrazólio (TTC) nas anteras são embebidas na solução, da mesma forma como e realizado com sementes, ele irá indicar o processo de redução que ocorre nas células vivas, onde o ácido málico interage com o tetrazólio produzindo o composto vermelho chamado trifenilformazan, que fica contido no interior da célula e não se difunde possibilitando a distinção de tecidos vivos e mortos (RAS, 2009). Deste modo o trabalho tem objetivo em avaliar a melhor concentração e tempo de exposição ao 2,3,5 Trifenil Cloreto de Tetrazolio para estimar a viabilidade polínica de Jacaranda copaia (Aubl.) D.Don.
2. Materiais e Métodos Este trabalho foi realizado no laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos Vegetais da Universidade do Estado de Mato Grosso, campus de Alta Floresta – MT. Para estimar a viabilidade polínica o material botânico, botões florais em pré antese de Jacaranda copaia foram coletados no município de Alta Floresta – MT. Foram retiradas as anteras e imersas em solução nas diferentes concentrações, 0,075% e 0,03% de 2,3,5 Trifenil Cloreto de Tetrazolio. Ciência & Tecnologia: Fatec-JB, Jaboticabal, v. 8, n.1, 2016. Número especial 2.
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A confecção das laminas foram feitas as 6, 12, 18 e 24 horas após imersas na solução, as anteras foram levemente maceradas sobre a lamina, juntamente com o a solução a para a liberação de polens. Para analise de cada corante foram observados 5 laminas, sendo contados 300 grãos de pólen por laminas (viáveis + inviáveis). Na avaliação os polens foram julgados como viáveis o os que apresentaram a coloração de roseo a vermelho intenso e inviáveis os não corados. A viabilidade polínica foi submetida a analise de variância, e as médias comparada pelo teste de Tukey (p ≤ 5%) utilizando o programa Assistat (SILVA et al., 2009).
3. Resultados e Discussões Por meio do experimento foi possível observar que a espécie Jacaranda copaia apresentou alta taxa de viabilidade, fator importante para a manutenção da espécie. Na concentração de 0,075% de TCC apresenta um crescente aumento de viabilidade no decorrer do tempo avaliado, no primeiro horário houve somente um pólen viável, após 24 horas do inicio do experimento foi observado viabilidade de 97,4 % sendo este horário o mais indicado para essa concentração do corante (Tabela 1). Para a concentração 0,3% a primeira avaliação foi superior ao primeiro corante seguidos 12h do inicio do experimento obteve a máxima viabilidade para a concentração 91,3%, sendo o período indicado para esta concentração, porem este valor foi inferior ao observado no primeiro corante menos concentrado (Tabela1), assim como observado por França (2008) a onde utilizou as concentrações de 1%, 0,75% e 0,5%, onde ouve um aumento na viabilidade de 0,5% para 0,75% e porem a 1% não possível identificar pela coloração muito escura do pólen.
Tabela-1 Valores médios percentuais de viabilidade polínica de J. copaia com TTC 0,075% e 0,30%, em diferentes tempos de exposição - Alta Floresta, MT. Tempo de Exposição Concentração 6h 12h 18h 24h 0,33 bC 1,73 bC 82,8 aB 97,4 aA TTC 0,075% 20 aC 91,33 aA 81,1 aB 84,2 bAB TTC 0,30% 8,66 CV% As médias seguidas pela mesma letra maiúscula nas linhas e minúsculas colunas não diferem estatisticamente entre si. Foi aplicado o Teste de Tukey ao nível de 5% de probabilidade . Métodos colorimétricos são práticos e rápidos, contudo podem subestimar ou superestimar os dados de viabilidade caso não seja observados fatores que possam influenciar no resultado, o Tretrazólio é um corante eficaz na identificação da estimativa da viabilidade, Ciência & Tecnologia: Fatec-JB, Jaboticabal, v. 8, n.1, 2016. Número especial 2.
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assim como observado por Munhoz (2008) com Carica papaya L o TTC e um método de estimar que mais se aproxima da germinação in vitro, para Hoffmamm (2008) a viabilidade polínica de cinco espécies de Tibouchina o uso do TTC a 0,5% apresentou resposta inferior a solução de Alexander e Carmin acético, deste modo é necessário avaliar o melhor método para obter uma estimativa confiável. Nas duas concentrações utilizadas é possível notar a distinção entre os pólens viáveis (férteis) e inviáveis (estéreis), pela coloração do grão de pólen os férteis por meio da interação com a solução tem seu núcleo corado em diferentes tons de roseo a vermelho, essa interação se dá pela atividade respiratória da célula, já os polens estéreis ou inférteis não apresentam atividade metabólica assim não apresentará coloração nenhuma apenas a cor natural do pólen.
4. Conclusão Dentre as concentrações e tempos de exposição avaliado o mais indicado e 0,30 % 12h caso haja necessidade do teste ser rápido, caso a avaliação for mais precisa e pode utilizar a concentração de 0,075% por um período de 24h sendo este o mais eficiente apresentando maior porcentagem de pólen viáveis, caso não necessite de uma resposta rápida.
Referencias DAFNI, A. Pollination ecology: a practical approach (the practical approach series). New York, Oxford: University press, 250 p, 1992. Flora do Brasil 2020 em construção. Jacaranda in. Jardim Botânico do Rio de Janeiro. Disponível em: . Acesso em: 18 Jun. 2016 FRANÇA, L. V. Secagem e conservação de grãos de pólen de berinjela. Dissertação de Mestrado - Universidade de Brasília/Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinaria, Brasilia, 2008. GENTRY, A.; MORAWETZ, W. Bignoniaceae.(Tribe Tricomeae). Flora Neotropica New York, v. 25, n. 2. Botanical Garden, 1992. HOFFMANN, G. M.; VARASSIN, I. G. 2011. Variação da viabilidade polínica em Tibouchina (Melastomataceae). Rodriguésia 62(1): 223-228. Disponível :< http://rodriguesia.jbrj.gov.br>. MARTINS, L. A. R; LAVIOLA, B. G.; PRAÇA-FONTES, M. M. 2012. Viabilidade polínica de Jatrophacurcas L.: uma comparação metodológica. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE Ciência & Tecnologia: Fatec-JB, Jaboticabal, v. 8, n.1, 2016. Número especial 2.
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MAMONA, 5; SIMPÓSIO INTERNACIONAL DE OLEAGINOSAS ENERGÉTICAS, 2.; FÓRUM CAPIXABA DE PINHÃO MANSO, Anais. Campina Grande: Embrapa. MUNHOZ, M.; LUZ, C. F. P.; MEISSNER FILHO, P. E.; BARTH, O. M.; REINERT, F. Viabilidade polínica de Carica papaya L.: uma comparação metodológica. Revista Brasil. Bot., V.31, n.2, p.209-214, abr.-jun, 2008 RAS, Regras para análise de sementes / Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuária. – Brasília : Mapa /ACS, 399 p, 2009 SILVA, F. DE A. S. E.; AZEVEDO, C. A. V. de. Principal Components Analysis in the Software Assistat-Statistical Attendance. In: WORLD CONGRESS ON COMPUTERS IN AGRICULTURE, 7, Reno-NV-USA: American Society of Agricultural and Biological Engineers, 2009.
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