Avaliação do potencial de biotransformação de clorotalonil via GSTs de Cyprinus carpio utilizando um ensaio competitivo RODRIGO SANTOS ¹; EDUARDO RIBEIRO ¹, ²; MALUARE CANTELE ¹, ²; JULIANO ZANETTE¹ 1. Instituto de Ciências Biológicas (ICB), Universidade Federal do Rio Grande (FURG). 2. Escola de Química e Alimentos (EQA), Universidade Federal do Rio Grande (FURG).
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Introdução
O clorotalonil (2,4,5,6-tetrachloroisophthalonitrile) é um composto orgânico utizado na formulação de tintas anti-incrustantes e amplamente encontrado em ambientes aquáticos. Como essa substância pode apresentar toxicidade para peixes, existe a necessidade de se entender sobre a capacidade de biotransformação deste composto em diferentes espécies. Sabe-se que as enzimas glutationa S-transferases (GSTs) tem um papelchave na biotransformação do clorotolonil. O presente estudo pretende determinar a concentração de clorotolonil necessária para inibir metade da atividade da enzima (IC50) utilizando um ensaio competitivo espectofotométrico com clorodinitro-benzeno
(CDNB).
Tem-se
por
objetivo
avaliar
o
potencial
de
biotransformação do clorotolonil por GSTs de Cyprinus carpio.
Metodologia
Um extrato de fígado de carpa foi preparado por homogeneização em tampão TRIS pH 7,6 com EDTA e DTT, centrifugação à 9000 x g por 30 min a 4° C para obtenção do sobrenadante correspondente à fração S9 citosólica. Para avaliar a atividade das GSTs de amostras de S9 de C. carpio foi realizado ensaio espectrofotométrico em triplicata contendo tampão fosfato de potássio pH 7,0, 1,2 mM CDNB, e 0,1 M de glutationa reduzida (GSH) à 30ºC por 3 min para obtenção do delta abs/min.
Para avaliar o efeito competitivo do contaminante clorotalonil com o substrato de amplo espectro CDNB foram testadas as concentrações de clorotalonil de 0, 4,2 uM, 8,4 uM, 42,0 uM, 84,0 uM, 126,0 uM, 168,0 uM. Os grupos testados foram comparados com o grupo sem clorotalonil por ANOVA seguida de Tukey (p
