XII CURSO DE INVERNO DE GENÉTICA – FCAV/UNESP
ESTIMATIVA DA VIABILIDADE DOS GRÃOS DE PÓLEN DE CANA-DO-BREJO BASEADA EM DISTINTOS MÉTODOS DE COLORAÇÃO ESTIMATE THE VIABILITY OF POLLEN GRAIN CANESWAMP BASED ON DIFFERENT METHODS OF STAINING Bruna Natália Veloso dos Santos(1) Weslaine de Almeida Macedo(1) Vanessa dos Santos de Mello(2) Jenifer Fernanda Damasio(2) Lorena Cristina Batista dos Santos(3) Douglas Machado Leite(4) Isane Vera Karsburg(5)
Resumo Conhecida como Cana-do-Brejo ou Cana-de-macaco, Costus spiralis apresenta importância ecológica, medicinal e econômica através do seu potencial ornamental. Estudos sobre a viabilidade polínica nós permite estimar a reprodução masculina de uma espécie, cultivar ou população. Devido a isso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade polínica de Costus spiralis, por meio do uso de diferentes corantes, a fim de fornecer subsídios para a conservação dessa espécie. Para avaliação da viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis foram utilizados flores frescas, sendo coletadas todos os dias uma flor. A estimativa da viabilidade polínica foi comparada com os corantes: Fucsina 1%, Verde Malaquita 1%, Lugol 2%, Azul de Astra, Carmim Acética, Reativo de Alexander e Orceina acética 2%. Por meio da estimativa da viabilidade dos grãos de pólen com uso dos diferentes corantes foi constatado que entre os corantes utilizados, as medias não se diferenciaram, mas quanto a diferenciação morfológica com o uso dos corantes, o Reativo de Alexander e o Lugol 2% apresentaram maior distinção entre os grãos de polens viáveis dos inviáveis. Palavras-chaves: Corantes. Costus spiralis (Jacq.) Roscoe. Costaceae. Zingiberales.
Abstract Known as the Cane-Swamp or Cane monkey, Costus spiralis presentes importance ecological, medicinal and economic through its ornamental potential. Studies on the pollen viability allows us estimate the male reproduction of a species, cultivar or population. Because of this, the present study aimed to evaluate the pollen viability Costus spiralis, through the use of different dyes, order to provide subsidies for the conservation of this species. For evaluation of the viability of pollen grain Costus spiralis were utilized fresh flowers, and collected every day a flower. The estimation of pollen viability was compared with the dyes: Fuchsin 1%, Green Malachite 1%, 2% Lugol, Blue Astra, carmine acetic, Reactive Alexander and orceine acética 2%. Through the estimate the viability of pollen ___________________________________________________________________________ 1
Graduandas do curso de Licenciatura Plena e Bacharelado em Ciências Biológicas – UNEMAT, Alta Floresta MT. E-mail:
[email protected]. 2Mestrandas em Genética e Melhoramento de Plantas pela Universidade do Estado de Mato Grosso- UNEMAT Campus Alta Floresta – MT. 3Bióloga, Educadora da Escola Estadual Vitória Furlani da Riva de Alta Floresta – MT. 4Graduando do curso de Bacharelado em Engenharia Florestal – UNEMAT, Alta Floresta – MT. 5Professora Adjunta do Departamento de Ciências Biológicas – UNEMAT- Campus de Alta Floresta – MT. Ciência & Tecnologia: Fatec-JB, Jaboticabal, v. 8, n.1, 2016. Número especial 2.
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grains with use of different dyes was found that among the dyes used, the media did not differ, but the morphological differentiation with the use of dyes, the Alexander Reactive and Lugol 2% had greater distinction between the grains of viable pollens of unviable. Keywords: Dyes. Costus spiralis (Jacq.) Roscoe. Castaceae. Zingiberales.
1. Introdução Costus spiralis (Jacq.) Roscoe é conhecida como cana-do-brejo ou cana-de-macaco, é uma erva com distribuição tanto Pantropical como Neotropical. A espécie é utilizada na medicina popular brasileira a fim de curar afecções urinarias, cálculo renal, auxiliar na cicatrização, diurético, controle da diabete, entre outras (BARRELLA et al., 2011), visto que estudos têm confirmado estas propriedades fitoterapêuticas (SILVA & PARENTE, 2004), no qual é importante possuir conhecimento sobre sua biologia reprodutiva a fim de conservação e manejo. Através de estudos sobre a viabilidade polínica é possível estimar o potencial de reprodução masculina de uma espécie, cultivar ou população, sendo importantes para caracterização de recursos genéticos e para auxiliar em trabalhos de melhoramento genético. Assim diferentes métodos colorímetros são empregados nesses estudos, que possuem como pontos positivos a rapidez e o baixo custo (KUHN, 2015). Devido a isso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade polínica de Costus spiralis, por meio do uso de diferentes corantes, a fim de fornecer subsídios para a conservação dessa espécie.
2. Material e Métodos As análises foram realizadas no Laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos da Universidade do Estado de Mato Grosso – UNEMAT, sendo o material coletado no município de Alta Floresta – MT. Para avaliação da viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis foram utilizados flores frescas, sendo coletado todo os dias uma flor. A estimativa da viabilidade polínica foi comparada com os corantes: Fucsina 1%, Verde Malaquita 1%, Lugol 2%, Azul de Astra 1%, Carmim Acético 2%, Reativo de Alexander e Orceina acética 2%. Para esses corantes, a viabilidade foi determinada pela capacidade de coloração dos grãos de pólen, sendo considerados viáveis os pólens que apresentaram tonalidades mais escuras e inviáveis aqueles que apresentaram tons mais claras de acordo com a característica de cada corante. Foram avaliadas 5 lâminas por corante sendo contabilizados 300 grãos de pólen por lâmina pelo método de varredura, sendo observados em microscópio óptico com aumento de 40x. Ciência & Tecnologia: Fatec-JB, Jaboticabal, v. 8, n.1, 2016. Número especial 2.
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As médias obtidas com os diferentes corantes foram submetidos ao teste de Tukey a 5% de probabilidade através do Programa Estatístico Sisvar 5.1® (FERREIRA, 2011).
3. Resultados e Discussão A utilização de diferentes corantes é um método considerado seguro para estimar a quantidade de grãos de pólen viáveis, o que permite relacionar de acordo com cada corante a integridade das estruturas (MENCK et al., 1990). Por meio da estimativa da viabilidade dos grãos de pólen com uso dos diferentes corantes, foi constatado que Orceina acética 2% foi o que apresentou melhor média, não se diferindo do Lugol 2% e Azul de Astra. Percebe-se que o segundo apresentando melhor média foi Reativo de Alexander e Verde Malaquita (Tabela 1). A Orceina acética 2% cora o material genético do pólen de vermelho sendo estes viáveis, com a utilização do lugol 2%, os grãos de pólen viável foram diferenciados dos inviáveis pela coloração intensa protoplasma em vermelho, já o Azul de Astra mostrou seus pólens em tonalidade azul escuro, de acordo com cada corante, os inviáveis foram considerados ausentes de coloração (Figura 1). A literatura nos propõe que entre os diferentes corantes já testados, o Reativo de Alexander tem se mostrado superior na análise desse parâmetro, devido mostrar uma melhor distinção entre grãos de pólen viáveis e inviáveis (KUHN, 2015). O Reativo de Alexander apresenta-se por meio de uma mistura de Verde Malaquita no qual interage com a celulose presente na parede celular corando-a de verde, e a Fucsina Ácida sendo o protoplasma corado de rosa, os que não apresentam protoplasma são abortados corando-se de verde (ALEXANDER, 1980; NETO et al., 2006). Já os corantes que apresentaram menor média foram Carmim Acético 2% e Fucsina Ácida 0,5% (Tabela 1 e Figura 1), porém segundo Souza et al., (2002), a viabilidade polínica é considerada alta quando apresentada acima de 70%, na qual essa porcentagem não resultaria em comprometimento de trabalhos de melhoramento.
TABELA 1-Valores médios percentuais de viabilidade polínica de C. spiralis, com os corantes: Fucsina 1%, Verde Malaquita 1%, Lugol 2%, Azul de Astra, Carmim Acético, Reativo de Alexander e Orceina. Corantes Carmim Acética 2% Fucsina Ácida 0,5% Reativo de Alexander
Viabilidade (%) 85,26 b 86,80 b 91,00 ab
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91,33 ab Verde Malaquita 1% 95,33 a Azul de Astra 1% 95,39 a Lugol 2% 97,33 a Orceina acética 2% Coeficiente de variação (%) 3,82 Médias seguidas de letras iguais não diferem pelo teste de Tukey a nível de 5% de significância.
FIGURA 1-Grãos de pólen de C. spiralis corados com diferentes corantes. Carmim acético 2% a) viável b) inviável; Fucsina acida 0,5% c) viável d) inviável; Reativo de Alexander e) viável f) inviável; Verde malaquita 1% g) viável h) inviável; Azul de Astra 1% i) viável j) inviável; Lugol 2% l) viável m) inviável; Orceina acética 2% n) viável o) inviável. Barra = 10µm.
4. Conclusão Por meio dos diferentes corantes utilizados em Costus spiralis, observa-se que as medias não se diferenciaram, mas quanto a diferenciação morfológica com o uso dos corantes, o Reativo de Alexander e o Lugol 2% apresentaram maior distinção entre os grãos de polens viáveis dos inviáveis.
Referências
ALEXANDER, M. P. A versatile stain for pollen fungi, yeast and bacteria. Stain technology, v. 55, n. 1, p. 13-18, 1980. BARRELLA, W.; BREIER, T. B.; LEME G. A. Levantamento etnobotânico do uso popular de plantas medicinais por comunidades rurais atendidas pela UBSF-Jundiaquara/Araçoiaba da Serra-SP. Revista Eletrônica de Biologia (REB), v. 3, n. 4, p. 89-105, 2011. FERREIRA, D. F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e Agrotecnologia, Lavras, v. 6, n.35, p.1039-1042, 2011.
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KUHN, A.W. Viabilidade polínica, Genotoxicidade, Efeito antiproliferativo e Compostos fenólicos de Peltodon Longipes Kunth Ex Benth. (Lamiaceae). Dissertação de Mestrado. Universidade Federal de Santa Maria – UFSM. Santa Maria/RS, p.58, 2015. MENCK, A. L. M.; ODA, S.; MARCHI, E. L.; KOVALSKI M. E. Influência do sistema de coleta de botões florais na viabilidade de pólen de Eucalyptus spp. Ipef, Suzano, v. 44, n. 43, p. 20-23, 1990. NETO, O. D. S.; KARSBURG, I. V.; YOSHITOME M.Y. Viabilidade e germinabilidade polínica de populações de jurubeba (Solanum paniculatum l.). Revista de Ciências AgroAmbientais, Alta Floresta, v. 4, n. 1, p. 67-74, 2006. SILVA, B. P.; PARENTE, J. P. New steroidal saponins from rhizomes of Costus spiralis. Zeitschrift für Naturforschung C, v. 59, n. 1-2, p. 81-85, 2004. SOUZA M. M.; PEREIRA, T. N. S.; MARTINS, E. R. Microsporogênese e microgametogênese associadas ao tamanho do botão floral e da antera e viabilidade polínica em maracujazeiro-amarelo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa degener). Ciência e Agrotecnologia, v. 26, n. 6, p. 1209-1217, 2002.
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