XII CURSO DE INVERNO DE GENÉTICA – FCAV/UNESP
ESTIMATIVA DA VIABILIDADE POLINICA DE CANA-DEMACACO BASEADO NO USO DE 2,3,5 CLORETO DE TRIFENILTETRAZOLIO ESTIMATE OF VIABILITY POLLEN OF MONKEY CANA BASED ON USE OF 2,3,5 CHLORIDE TRIPHENYLTETRAZOLIUM Bruna Natália Veloso dos Santos(1) Weslaine de Almeida Macedo(1) Vanessa dos Santos de Mello(2) Jenifer Fernanda Damasio(2) Lorena Cristina Batista dos Santos(3) Douglas Machado Leite(4) Isane Vera Karsburg(5)
Resumo Costus spiralis (Jacq.) Roscoe, popularmente conhecida como cana-de-macaco ou cana-dobrejo é uma herbácea natural da América do Sul e do Brasil, é reconhecida por seu potencial medicinal, ornamental e ecológica, sendo frequente seu uso na medicina popular. A viabilidade do pólen é um estudo de grande importância para plantas, visto que estima-se a potencialidade reprodutora masculina da espécie, cultivar ou população, auxiliando em estudos taxonômicos, ecológicos, palinológicos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis, por meio de diferentes concentrações de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) e diferentes tempos de exposição, a fim de obter informações que corroborem para a conservação dessa espécie. Para avaliação da viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis foram utilizados flores frescas em pré antese, sendo coletado todo os dias uma flor. O pólen foi retirado e colocado em tubos do tipo eppendorf com 4mL das diferentes concentrações 0,30% e 0,075% de Cloreto de 2,3,5Trifeniltetrazólio (TTC) separadamente, permanecendo 12 e 24 horas de exposição. Verificou-se que a concentração de 0,30% com 12 horas de exposição obteve coloração vermelho intenso os grãos de pólen viáveis. Na concentração 0,75% observa-se que nas exposições de 12 e 24horas não houve diferença na coloração dos grãos de pólen viáveis. Palavras-chaves: Costus spiralis (Jacq.) Roscoe. Costaceae. Pólen. Zingiberales.
Abstract Costus spiralis (Jacq.) Roscoe, popularly known as cane monkey or cane of the swamp is a natural Herbaceous from South America and Brazil, is recognized for its medicinal, ornamental and ecological potential, and frequent use in folk medicine. The pollen viability is _________________________________________________________________________________________ 1 Graduandas do curso de Licenciatura Plena e Bacharelado em Ciências Biológicas – UNEMAT, Alta Floresta MT. E-mail:
[email protected]. 2Mestrandas em Genética e Melhoramento de Plantas pela Universidade do Estado de Mato Grosso- UNEMAT Campus Alta Floresta – MT. 3Bióloga, Educadora da Escola Estadual Vitória Furlani da Riva de Alta Floresta – MT. 4Graduando do curso de Bacharelado em Engenharia Florestal – UNEMAT, Alta Floresta – MT. 5Professora Adjunta do Departamento de Ciências Biológicas-UNEMAT – Campus de Alta Floresta – MT.
a very important study for plants, seen it is estimated the male reproductive potentiality of the
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XII CURSO DE INVERNO DE GENÉTICA – FCAV/UNESP species, cultivar or population, assisting in taxonomic studies, ecological, palynological. The present study aimed to assess the viability of Costus spiralis pollen grains by means of different concentrations of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) and different exposure times in order to get information in support for the conservation of this species. For assessing viability of the pollen grains of C. spiralis were utilized fresh flowers in pre anthesis, being collected every day a flower. The pollen was taken down and laid in Eppendorf tubes with 4mL different concentrations of 0.30% and 0.075% of 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) separately remaining 12 to 24 hours of exposure. It is found that the concentration of 0.30% with 12 hours of exposure has obtained intense red staining of viable pollen grains. In concentration 0.75% is observed that the exposures of 12 and 24 hours there was no difference in the color of viable pollen grains. Keywords: Costus spiralis (Jacq.) Roscoe. Cactaceae. Pollen. Zingiberales.
1. Introdução Costus spiralis (Jacq.) Roscoe, popularmente conhecida como cana-de-macaco ou cana-do-brejo é uma herbácea natural da América do Sul e do Brasil, podendo ser encontrada em florestas chuvosas, savanas e em afloramentos graníticos (SANTOS, 2009). Costus spiralis é reconhecida por seu potencial medicinal, ornamental e ecológica, sendo frequente seu uso na medicina popular para tratar infecções urinárias, pedras nos rins e diabetes, além de atuar como um antioxidante, um agente antibacteriano, diurético e cicatrizante, no Brasil ocorrem nos estados do: Amazonas, Ceará, Goiás, Mato Grosso, Minas Gerais, Pará, Paraná, Pernambuco, Santa Catarina e São Paulo (ASCÊNCIO et al., 2014). Suas flores vêm se destacando no mercado ornamental devido suas características morfológicas e exuberantes presentes em espécies tropicais cultivadas do gênero Costus e por apresentar uma ótima durabilidade pós colheita (SANTOS, 2009). Segundo Araújo & Oliveira, (2007), a polinização nesse gênero é limitada, indicando alto grau de especialização de acordo com seus polinizadores como as abelhas Eulaema (Apeulaema) nigrita, beija-flores sendo a espécie mais vista Phaethornis pretrei e borboletas da família Hesperiidae. A viabilidade do pólen é um estudo de grande importância para plantas, visto que se estima a potencialidade reprodutora masculina da espécie, cultivar ou população, auxiliando em estudos taxonômicos, ecológicos, palinológicos, apresentando informações básicas para conservação e melhoramento genético (AULER et al., 2006). O presente trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis, através de diferentes concentrações de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) e diferentes tempos de exposição, a fim de obter informações que corroborem em avaliações referentes a fertilidade das espécies.
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2. Material e Métodos As análises foram realizadas no Laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos da Universidade do Estado de Mato Grosso – UNEMAT, sendo o material coletado no município de Alta Floresta – MT. Para avaliação da viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis foram utilizados flores frescas, sendo coletado todo os dias uma flor. O pólen foi retirado e colocado em tubos do tipo eppendorf com diferentes concentrações 0,30% e 0,075% de Cloreto de 2,3,5-Trifeniltetrazólio (TTC) permanecendo em diferentes horários de exposição 12 e 24 horas. Cada flor coletada foi submetida as duas concentrações e observado em um determinado horário, não sendo a mesma flor utiliza para demais horários. Para esse corante, a viabilidade foi determinada pela capacidade de coloração dos grãos de pólen, sendo considerados viáveis os pólens que apresentaram tonalidade em vermelho e inviáveis aqueles que apresentaram tons mais claras ou transparentes. Foram avaliadas 5 lâminas de acordo com cada concentração e horário, sendo contabilizados 300 grãos de pólen por lâmina por meio do método de varredura, observados em microscópio óptico com aumento de 40x. As médias obtidas com as diferentes concentrações do corante foram submetidos ao teste de Tukey a 5% de probabilidade através do Programa Estatístico Sisvar 5.1 ® (FERREIRA, 2011).
3. Resultados e Discussão Na avaliação da viabilidade dos grãos de pólen C. spiralis com uso das diferentes concentrações de TTC, verificou-se que 0,30% com 12 e 24 horas obtiveram as maiores medias de polens viáveis (Tabela 1) e melhor coloração dos polens viáveis, (Figura 1). O TTC na concentração de 0,075% não apresentou distinção nítidas dos grãos de pólen viáveis dos inviáveis (Figura 1). Segundo Neto et al., (1988) o teste cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) reage através da atividade enzimática desidrogenase do ácido málico, no qual reduz o sal de tetrazólio nos tecidos vivos onde íons de H+ são transferidos para o referido sal. Assim ocorre uma reação de redução nas células vivas, formando um composto vermelho, não difusível, conhecido como trifenilformazan, que mostra a atividade respiratória nas mitocôndrias e, logo, que o tecido é viável (vivo) (ZONTA et al., 2009).
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XII CURSO DE INVERNO DE GENÉTICA – FCAV/UNESP O teste do TTC é considerado confiável por permitir a distinção entre os pólens viáveis por apresentar a reação química e os não viáveis com ausência de coloração, sendo um corante relacionado com a respiração celular do pólen, sendo corado apenas os que se encontram vivos ou viáveis através desta técnica. FIGURA 1- Grãos de pólen de C. spiralis corados com tetrazólio. TTC 0,30% exposição de 12 horas a) viável b) inviável; TTC 0,30% exposição de 24 horas c) viável d) inviável. TTC 0,075% exposição de 12 horas e) viável f) inviável; 0,075% exposição 24 horas g) viável h) inviável. Barra = 10µm.
TABELA 1-Valores médios percentuais de viabilidade polínica de C. spiralis, com os corantes: Tetrazólio 0,075% e Tetrazólio 0,30%, sob diferentes horários de exposição. Concentrações
Tempos 12 horas 24 horas 91,46 Bb 96,20 Aa 97,20Aa 96,19 Aa 1,82
0,075% 0,30% Coeficiente de variação (%) Médias seguidas pela mesma letra maiúscula nas linhas e minúsculas nas colunas não diferem entre si, pelo teste de Tukey ao nível de 5% de significância.
4. Conclusão A partir dos dados, conclui-se que a concentração de 0,30% com 12 horas de exposição foi satisfatório na coloração dos grãos de pólen para a espécie em questão.
Referências ARAÚJO, F. P.; OLIVEIRA, P. E. Biologia floral de Costus spiralis (Jacq.) Roscoe (Costaceae) e mecanismos para evitar a autopolinização. Revista Brasileira de Botânica, v. 30, n. 1, p. 61-70, 2007. ASCÊNCIO, P. G. M.; ASCÊNCIO, S. D.; AGUIAR, A. A.; FIORINI, A.; PIMENTA, R. S. Chemical assessment and antimicrobial and antioxidant activities of endophytic fungi extracts Ciência & Tecnologia: Fatec-JB, Jaboticabal, v. 8, n.1, 2016. Número especial 2.
XII CURSO DE INVERNO DE GENÉTICA – FCAV/UNESP isolated from Costus spiralis (Jacq.) Roscoe (Costaceae). Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, v. 2014, 2014. AULER, N. M. F.; BATTISTIN, A.; REIS, M. S. Número de cromossomos, microsporogênese e viabilidade do pólen em populações de carqueja [Baccharis trimera (Less.) DC.] do Rio Grande do Sul e Santa Catarina. Revista Brasileira de Plantas Medicinais, v. 8, n. 2, p. 55-63, 2006. FERREIRA, D. F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e Agrotecnologia, Lavras, v. 6, n. 35, p. 1039-1042, 2011. NETO, J. B. F.; PEREIRA, L. A. G.; COSTA, N. P.; KRZYZANOWSKI, F. C.; HENNING, A. A. Metodologia do teste de tetrazólio em semente de soja. EMBRAPA-CNPSo. Documentos, 1988. SANTOS, V. R. Crescimento, propagação, floração e compostos de reserva em Costus Arabicus L. Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, p.112, 2009. ZONTA, J. B.; SOUZA, L. T.; DIAS, D. C. F. S.; ALVARENGA, E. M. Comparação de metodologias do teste de tetrazólio para sementes de cafeeiro. Idesia (Arica), v. 27, n. 2, p. 17-23, 2009.
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