Interação de concentrações de ANA e BAP na indução de calos de menta japonesa (Mentha arvensis L.). Valéria O. Fonseca; Andréa S. da Costa; Josefa G. S. Santana; Thatiana C. Santos; Maria de Fátima Arrigoni-Blank; Túlio H. B. de Santana; Arie F. Blank. UFS - Depto. de Eng. Agronômica, Av. Marechal Rondon s/n, 49100-000 São Cristóvão-SE. E-mail:
[email protected] (Apoio: CNPq e RARO´S).
RESUMO Menta japonesa (Mentha arvensis L.) é uma espécie aromática de grande interesse comercial devido à produção de óleo essencial rico em mentol. Com este trabalho objetivouse avaliar o efeito de diferentes concentrações de ANA e BAP na indução de calo. Testou-se cinco concentrações de ANA (0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg.L-1) e três de BAP (0; 5,0 e 10,0 mg.L-1). Foi utilizado como fonte de explante segmento foliar retirado de plantas cultivadas em casa de vegetação. Segmentos foliares e a interação ANA x BAP foram efetivas na indução de calos de M. arvensis utilizando-se o meio MS suplementado de ANA (0,5 mg.L-1) + BAP (0,5 mg.L-1) ou de ANA (2,0 mg.L-1) na ausência de BAP. Palavras-chaves: Mentha arvensis, calos, planta medicinal e aromática, cultura de tecidos. ABSTRACT Interaction of NAA and BAP concentrations on the induction of japanese mint (Mentha arvensis L.). Japanese mint (Mentha arvensis L.) is an aromatic plant with high commercial interest because of the production of essential oil rich in menthol. The aim of this work was to evaluate the effect of different concentrations of NAA and BAP on callus induction. We tested five concentrations of NAA (0; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0 mg.L-1) and three of BAP (0; 5.0 e 10.0 mg.L1
). Foliar segment from plants cultivated in greenhouse were used as explants. Foliar
segments and the interaction NAA x BAP were effective on callus induction of M. arvensis when we use MS medium supplemented with NAA (0.5 mg.L-1) + BAP (0.5 mg.L-1) or NAA (2.0 mg.L-1) without BAP. Keywords: Mentha arvensis, callus, medicinal and aromatic plant, tissue culture O gênero Mentha (Lamiaceae) compreende cerca de 25 espécies diferentes de hortelã, sendo a Mentha arvensis L. uma das espécies mais estudadas devido à produção de
óleo essencial rico em mentol, muito utilizado nas indústrias de perfumaria, de higiene e de tabaco, sendo, portanto de grande importância econômica (Martins, 2002). A propagação vegetativa in vitro, também denominada de micropropagação devido ao tamanho dos propágulos utilizados, é a técnica de maior aplicabilidade da cultura de tecidos e aquela de maior impacto, uma vez que proporciona obtenção de um grande número de plantas com elevado nível qualitativo (Grattapaglia e Machado, 1998), sendo apropriado para clonar indivíduos melhorados produzindo progênies homogêneas, além de ser uma alternativa que possibilita a conservação do material genético e favorece o melhoramento da espécie (Lameira, 2005). O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito de diferentes concentrações de ácido naftalenoacético (ANA) e 6-benzilaminopurina (BAP) na indução de calo de M. arvensis L. MATERIAL E MÉTODOS O ensaio foi realizado no Laboratório de Cultura de Tecidos e Melhoramento Vegetal do Departamento de Engenharia Agronômica da Universidade de Sergipe. As plantas de M.arvensis foram cultivadas em vasos contendo solo, areia e esterco (1:1:1) e mantidos em casa de vegetação. Os segmentos foliares utilizados como explantes foram desinfetados com hipoclorito de sódio (1%), e duas gotas de tween-20 por 100 mL de solução, seguido de imersão em solução de cloreto de mercúrio (0,1%) por 1 minuto e lavados três vezes com água destilada e autoclavada. O meio de cultivo utilizado foi o MS (Murashige e Skoog, 1962) acrescido de 30 g.L-1 de sacarose e 7 g.L-1 de ágar. O pH do meio foi ajustado para 5,7 ± 0,1 e posteriormente autoclavado (121°C e 1,05 atm) por 20 minutos. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial de 5x3, sendo cinco níveis de ANA (0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg L-1) e três de BAP (0; 0,5; 10,0 mg L-1) . Foram utilizados cinco repetições com três frascos por repetição e três explantes foliares por frasco. Após a inoculação os explantes foram mantidos em sala de crescimento com temperatura controlada de 25 ± 2°C, fotoperiodo de 16 horas de luz e intensidade luminosa de 30µmol.m-2.s-1. Aos 30 dias, as culturas foram avaliadas quanto a formação de calos (%), coloração, consistência, brotações (%), formação de raízes (%) e massa fresca e seca (mg) de calo.
RESULTADOS E DISCUSSÃO A interação de ANA x BAP proporcionou diferenças significativas em todas as variáveis analisadas (Tabela 1). Tabela 1. Valores médios de calo (%), massa fresca e seca de calo (mg), brotações (%) e raízes (%) in vitro de M. arvensis, em função da interação BAP x ANA. São Cristóvão-SE, UFS, 2006. -1
ANA (mg. L )
-1
BAP (mg. L ) 0,0 0,5 10,0 ----------------------------------Calo (%)---------------------------------0,0 0,00 bB 8,89 bAB 13,33 bA 0,5 0,00 bB 97,78 aA 95,56 aA 1,0 0,00 bB 91,11 aA 97,79 aA 1,5 0,00 bB 100,00 aA 97,79 aA 2,0 77,78 aB 100,00 aA 100,00 aA ---------------------Massa Fresca de Calo (mg) --------------------0,0 0,00 bB 32,77 cA 16,76 cA 0,5 0,00 bC 133,96 bB 229,38 aA 1,0 0,00 bC 238,73 aA 153,37 bB 1,5 0,00 bB 178,99 bA 195,76 abA 2,0 226,75 aA 253,87 aA 250,14 aA ----------------------Massa Seca de Calo (mg) ---------------------0,0 0,00 bB 5,02 dA 3,15 dA 0,5 0,00 bB 27,72 cA 32,20 bcA 1,0 0,00 bC 34,37 bcA 27,15 cB 1,5 0,00 bB 39,89 bA 37,29 bA 2,0 28,05 aB 47,06 aA 47,33 aA -------------------------------Brotações (%)------------------------------0,0 0,00 aB 11,11 abA 4,44 aA 0,5 0,00 aB 17,78 aA 11,11 aA 1,0 2,22 aA 6,67 abA 4,44 aA 1,5 0,00 aB 2,22 bA 11,11 aA 2,0 0,00 aA 2,22 bA 2,22 aA ---------------------------------Raízes (%)--------------------------------0,0 22,22 cA 2,22 cB 0,00 dC 0,5 82,22 abA 20,00 bcB 6,67 cdB 1,0 84,45 aA 35,55 bB 26,66 bcB 1,5 57,78 bB 100,00 aA 42,22 abB 2,0 82,22 abA 86,67 aA 64,44 aA Médias seguidas por letras distintas, minúsculas nas colunas e maiúsculas nas linhas, diferem entre si pelo testes de Duncan (p < 0,05).
A indução de calos em M. arvensis foi observada em explantes inoculados em meio contendo 0,5 a 2,0 mg.L-1 de ANA acrescido de 0,5 ou 10,0 mg. L-1 de BAP. Resultados semelhantes foram obtidos por Shasany et al. (1998) utilizando segmentos internodais inoculados em meio contendo 1,5 e 2,0 mg.L-1 ANA + 5,0 ou 10,0 mg.L-1 de BAP. Na ausência de BAP, somente com a utilização de 2,0 mg.L-1 de ANA foi possível à formação de calos. Os calos apresentaram-se com uma consistência compacta, e com uma coloração
verde escura, exceto para os tratamentos que continham 1,0 e 2,0 mg.L-1 ANA, cujos calos apresentaram uma coloração branco-amarelada. Para a variável massa fresca de calos, a concentração de 0,5 mg.L-1 de BAP proporcionou os maiores valores com a utilização de 1,0 e 2,0 mg.L-1 de ANA e na concentração de 10 mg.L-1 de BAP as maiores médias foram obtidas quando foram utilizadas 0,5; 1,0 e 2,0 mg.L-1 de ANA. Entretanto, para massa seca de calos, a concentração de 2,0 mg.L-1 de ANA e 0,5 e 10,0 mg.L-1 de BAP proporcionaram os maiores valores (Tabela 1). Brotações originadas a partir de calos, foram observadas nas concentrações de 0,5 e 10,0 mg.L-1 BAP acrescido ou não de ANA (0 a 2,0 mg.L-1). Já a presença de raízes foi observada em todos os tratamentos, exceto quando foi utilizado 10,0 mg.L-1 de BAP na ausência de ANA (Tabela 1). Segmentos foliares e a interação BAP x ANA foram efetivas na indução de calos de M. arvensis utilizando-se o meio MS suplementado de BAP (0,5 mg.L-1) + ANA (0,5 mg.L-1) ou de ANA (2,0 mg.L-1) na ausência de BAP. LITERATURA CITADA ARAÚJO, M. P. Contribuição ao estudo das propriedades físico-químicas do óleo da Mentha arvensis cultivada no Paraná. Curitiba: UFPR, 1966. 98p (Mestrado - Universidade Federal do Paraná). GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M.A. Micropropagação. In: TORRES, A.C.; CALDAS, L.S.; BUSO, J.A. (Eds.). Cultura de tecidos e transformação genética de plantas. Brasília: EMBRAPA - CNPH, 1998. p.183-260. LAMEIRA, O.A.; LOPES S.C.; NOGUEIRA, R.C.; CORDEIRO, I.M.C.C.; PINTO, J.E.B.P.; REIS, L.R.S. Efeito de diferentes concentrações de reguladores de crescimento sobre a micropropagação de mogno (Swietenia macrophylla King) por meio de explantes juvenis. Plant cell Culture & Micropropagation, v.1.n.2, p. 53-58, 2005. MARTINS, M.B.G. Botânica e Fisiologia Vegetal: Estudos de microscopia óptica e da microscopia eletrônica de varredura em folhas de Mentha spicata e de Mentha spicata x suaveolens (Lamiaceae). Bragantia, v. 61, n. 3, 205 – 218, 2002. MURASHIGE, T., SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tabacco tissue culture. Physiologia Plantarum, v.15, p.473-497, 1962. SHASANY, A. K.; KHANUJA, S. P. S.; DHAWAN, S.; YADAV, U.; SHARMA, S.; KUMAR, S. High regenerative nature of Mentha arvensis internodes. Indian Academy of Sciences, n.5, p. 641-646,1998.
