PRACTICA AMILASA SALIVAL. UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

PRÁCTICA N 1: ACCIÓN DE LA AMILASA SALIVAL CURSO: BIOQUÍMICA 1 PARA ESTUDIANTES DE FARMACIA UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS CHICLAYO DOCENTE: MG. RICHARD GARCÍA ISHIMINE

I.

GENERALIDADES

La saliva contiene amilasa que hidroliza el almidón para formar maltosa y dextrina. Esta isoforma de la amilasa se conoce también como ptialina, nombrada así por el químico sueco Jöns Jacob Berzelius, el nombre deriva de la palabra griega πτυω (ptiō, escupir), debido a que la sustancia se obtuvo de la saliva.4 La ptialina hidroliza las grandes moléculas de almidón insoluble, para formar almidones solubles (amilodextrina, eritrodextrina y acrodextrina), produciendo sucesivamente moléculas de almidones cada vez más pequeñas, hasta formar al final maltosa. La ptialina actúa sobre los enlaces glicosídicos α(1,4), pero la hidrólisis completa requiere de una enzima que actúe además sobre los productos ramificados. La amilasa salival resulta inactivada en el estómago por el ácido gástrico. En el jugo gástrico a pH 3,3 la ptialina resulta totalmente inactivada en 20minutos a 37ºC. En contraste, luego de 150 minutos en jugo gástrico a pH 4,3, aún se retiene el 50% de la actividad amilasa.5 Tanto el almidón, el sustrato para la ptialina, como el producto, polímeros de glucosa de cadena corta, son capaces de protegerla parcialmente contra la inactivación debida al ácido gástrico. Al añadir ptialina a una solución tamponada a pH 3,0, esta resulta totalmente inactivada en 120 minutos; sin embargo la adición de almidón al 0,1% produce que luego de 120 minutos la solución aún conserve 10% de actividad amilasa; y la adición de almidón al 1,0 permite el mantenimiento del 40% de la actividad amilasa a los 120 minutos. El gen de la amilasa salival ha sufrido duplicaciones durante la evolución, y los estudios de hibridación de ADN indican que muchos individuos poseen múltiples repeticiones en tándem del gen. El número de copias del gen se correlaciones con los niveles de amilasa salival, como puede ser medida por ensayos tipo blot utilizando anticuerpos contra la amilasa humana. El número de copias del gen se encuentra aparentemente asociado con la exposición evolutiva a dietas ricas en almidón. Por ejemplo, un individuo japonés posee 14 copias del gen de la amilasa (un alelo con 10 copias, y un segundo alelo con cuatro copias). La dieta japonesa, tradicionalmente, contiene grandes cantidades de almidón proveniente del arroz. En contraste, un individuo de la etnia biaka posee solo seis (tres copias en cada alelo). Los biaka son cazadores-recolectores de la selva húmeda que tradicionalmente han consumido bajas cantidades de almidón en su dieta. Perry y colegas han especulado que este aumento en el número de copias del gen de la amilasa salival pudo haber desempeñado un papel en el aumento de la supervivencia durante la transición a dietas ricas en almidón durante la evolución humana

II.

REACTIVOS Y MATERIALES - Cocina eléctrica - Vasos de precipitado de 50 ml y 100 ml - Gradilla - Pipetas de 5 ml y 1ml - Pizeta - Agua destilada - 8 tubos de ensayo - Gotas de Lugol - Reactivo de Benedict - Hidróxido de sodio al 10% - 200 gr de maicena - H2SO4 al 10% - Cubos de hielo - Gasa Médica - Amilasa Salival

III.

PROCEDIMIENTO

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En un vaso de precipitado agregar 5 gr de maicena luego añadir 40 ml de agua destilada Homogenizar la muestra Cubrir con una gasa en otro vaso de precipitado Enjuagar la boca. Adicionar 10 ml de saliva. No debe formarse espuma

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Preparación de baño María. Temperatura 37° C Hervir agua corriente en un vaso de precipitación, 100 ml, luego enfriar a 37°C. Medir con termómetro.

Esquema:

Tubo / Solución Solución de almidón Lugol Sol. H2SO4 Sol. NaOH Saliva Baño maría 15 min

1 2 ml

2 2 ml

3 2 ml

4 2 ml

4 gotas 1 ml

4 gotas

4 gotas

4 gotas

1ml SI

2 gotas 1ml SI

1ml SI

1 ml NO

Tubo / Solución Solución de almidón Benedict Sol. H2SO4 Sol. NaOH Saliva Baño maría 15 min

1 2 ml

2 2 ml

3 2 ml

4 2 ml

1 ml 1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

2 gotas 1ml SI

1ml SI

1 ml NO

1ml SI

PARA EL INFORME:

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Reacciones de los diferentes experimentos Porque las diferentes coloraciones en cada tubo de ensayo? Explique las razones de las reacciones en cada tubo de ensayo? Cuáles son los factores que aceleran las reacciones? Procedimiento